Kemijski sastav od nehrđajućeg čelika 347 Veličina venske ili kapilarne krvi, specifična za SARS-CoV-2, odgovor T-stanica određuje imunitet na COVID-19.

Hvala što ste posjetili Nature.com.Koristite verziju preglednika s ograničenom CSS podrškom.Za najbolje iskustvo preporučujemo da koristite ažurirani preglednik (ili onemogućite način kompatibilnosti u Internet Exploreru).Osim toga, kako bismo osigurali stalnu podršku, web stranicu prikazujemo bez stilova i JavaScripta.
Klizači koji prikazuju tri članka po slajdu.Za pomicanje kroz slajdove koristite gumbe Natrag i Sljedeće ili gumbe za upravljanje slajdovima na kraju za kretanje kroz svaki slajd.

347 nehrđajući čelik kemijski sastav

Kemijski sastav cijevi zavojnice od nehrđajućeg čelika 347

Kemijski sastav i mehanička svojstva spiralne cijevi od nehrđajućeg čelika 347 su sljedeći:
- Ugljik – 0,030% max
- Krom – 17-19%
- Nikal – 8-10,5%
- Mangan – 1% max

Mehanička svojstva zavojne cijevi od nehrđajućeg čelika 347

Prema proizvođaču cijevi zavojnice od nehrđajućeg čelika 347, mehanička svojstva cijevi zavojnice 347:
- Vlačna čvrstoća (psi) – 75.000 min
- Granica tečenja (psi) – 30.000 min
- Istezanje (% u 2″) – 25% min
- Brinellova tvrdoća (BHN) – 170 max

Primjene i upotreba cijevi zavojnice od nehrđajućeg čelika 347

• Zavojna cijev od nehrđajućeg čelika 347 koja se koristi u šećeranama.
• Zavojna cijev od nehrđajućeg čelika 347 koja se koristi u gnojivima.
• Zavojna cijev od nehrđajućeg čelika 347 koja se koristi u industriji.
• Zavojna cijev od nehrđajućeg čelika 347 koja se koristi u elektranama.
• Zavojna cijev od nehrđajućeg čelika 347 koja se koristi u hrani i mliječnim proizvodima.
• Zavojna cijev od nehrđajućeg čelika 347 koja se koristi u postrojenjima za naftu i plin.
• Proizvođač zavojnih cijevi od nehrđajućeg čelika 347 koji se koristi u brodograđevnoj industriji.

Smatra se da T-stanice specifične za SARS-CoV-2 štite od infekcije i napredovanja COVID-19, ali za to nema izravnih dokaza.Ovdje smo usporedili mjerenja pune krvi SARS-CoV-2-specifičnih interferon-γ pozitivnih T stanica s pozitivnim rezultatima dijagnostičkog testa na COVID-19 (PCR i/ili lateralni protok) unutar 6 mjeseci od uzimanja Lianine krvi.Među 148 sudionika koji su darivali uzorke venske krvi, veličina odgovora T stanica specifičnog za SARS-CoV-2 bila je znatno veća kod onih koji su ostali zaštićeni nego kod onih koji su bili zaraženi (P <0,0001).% rizika od infekcije, dok je visoki intenzitet smanjio ovaj rizik na 5,4%.Ovi su rezultati generalizirani na dodatnih 299 sudionika koji su testirali skalabilni test kapilarne krvi koji bi mogao olakšati pristup podacima o imunosti T-stanica na populacijskoj razini (14,9% naspram 4,4%).Stoga mjerenje T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 može predvidjeti rizik od infekcije i treba ga procijeniti prilikom praćenja imunološkog statusa pojedinca i populacije.
Mjerenje i razumijevanje imunološkog odgovora na infekciju SARS-CoV-2 važno je za razvoj učinkovitih budućih strategija za smanjenje utjecaja na javno zdravlje i gospodarstva budućih izbijanja COVID-19.Identifikacija imunoloških korelata pružit će važne informacije o osjetljivosti populacije na virusne infekcije, moguće rano upozorenje o najvećem broju hospitalizacija, a također će omogućiti ljudima da osobno upravljaju svojim rizikom od infekcije i rizikom od zaraze drugih.Imunološki nadzor pokazao se ključnim za procjenu učinkovitosti cjepiva protiv COVID-19 kod zdravih i visokorizičnih pacijenata1,2,3 posebno kod mutanata SARS-CoV-24, a otkrivanje imunokompromitiranih značit će potrebu za jačanjem imuniteta. Cijepite se i spriječite buduće epidemije .
Razina imuniteta pojedinca na infekciju SARS-CoV-2 ovisi o više čimbenika: virusnom opterećenju u vrijeme izlaganja, varijantama virusa, dobi, prethodnom statusu cijepljenja/infekcije, komorbiditetima, lijekovima i što je najvažnije, anti-SARS-CoV infekciji .2 adaptivni imunološki odgovor javlja se u trenutku izlaganja virusu5.Procjena imunološkog odgovora na infekciju SARS-CoV-2 i/ili cijepljenje usredotočena je na serološke testove koji mjere prisutnost protutijela specifičnih za strukturni protein (npr. spike glikoprotein).Međutim, sama prisutnost ili odsutnost protutijela ne određuje točno zaštitni imunološki odgovor, budući da su odgovori značajno oslabljeni tijekom vremena6 i neutralizacija varijanti SARS-CoV-2 kod osoba koje se oporavljaju ili su dvostruko cijepljene Slaba aktivnost, što bi moglo dovesti do velikog broj probojnih infekcija7.Doista, zaštita od simptomatske bolesti COVID-19 uzrokovane varijantom Omicron (B.1.1.529) oslabila je na oko 10% nakon samo 4-6 mjeseci cijepljenja mRNA, iako je zaštita od teške bolesti trajala >68% najmanje 7 mjeseci8.Mjerenje adaptivnih memorijskih T-staničnih odgovora, koji osiguravaju dugotrajnu zaštitu od virusnih infekcija, najbolji je pokazatelj osjetljivosti na infekciju SARS-CoV-2, a time i bolji pokazatelj rizika od pozitivnog testiranja na COVID-199, budući da specifični T stanice mogu spriječiti infekciju.bez serokonverzije10,11.Međutim, mjerenje odgovora T stanica dobilo je manje pozornosti zbog metodoloških poteškoća i logističkih problema u dobivanju i transportu uzoraka venske krvi, posebno kada se provode velike opservacijske studije za procjenu učinkovitosti cjepiva i praćenje imuniteta.Međutim, cijepljene osobe pokazuju snažnu aktivnost T stanica protiv varijanti SARS-CoV-2, potencijalno nadoknađujući gubitak reaktivnosti protutijela kako bi se ograničila ozbiljnost COVID-1912,13.
Ovdje smo nastojali razumjeti može li jedno mjerenje odgovora T stanica SARS-CoV-2 predvidjeti apsolutni rizik od infekcije SARS-CoV-2 unutar 6 mjeseci od uzorkovanja krvi, bez obzira na prethodne čimbenike koji utječu na imunološki sustav.Kako bismo test T stanica učinili visokoučinkovitim i primjenjivim na veće studije, također smo pokušali učiniti test minijaturiziranim tako da se može izvesti pomoću kapilarnog uzorka krvi iz prsta.
Mjerili smo stanične i humoralne imunološke odgovore u zdravih darivatelja koristeći kombiniranu detekciju SARS-CoV-2 T stanica i IgG protutijela na temelju pune venske krvi (za karakteristike sudionika, pogledajte ožujak 2022. 14. U cijepljenih darivatelja, SARS-CoV-2- specifični T-stanični odgovori određeni su mjerenjem razine interferona-γ (IFN-γ) u plazmi nakon stimulacije pune krvi peptidom SARS-CoV-2 (kao i ranije, reference 14,15,16,17,18) i odgovora povezanih IgG s nukleokapsidom (N) bili su povećani u onih koji su prijavili prethodnu infekciju, iako su oba odgovora bila veća u prethodno zaraženih necijepljenih darivatelja, maksimalna u tijelu (Slika 1a,b). IgG odgovori protiv šiljastih glikoproteina (RBD, S1, S2) bile su najviše kod prethodno zaraženih cijepljenih darivatelja (Slika 1c–e).
IFN-γ+ T-stanični odgovori specifični za SARS-CoV-2 izmjereni su analizom pune venske krvi i temeljeni na cijepljenju sudionika i prethodnom statusu infekcije SARS-CoV-2 (potvrđeno PCR-om i/ili testom bočnog protoka)' Vac + /Inf +' n = 60 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 82 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žuto), 'Vac-/Inf-' n = 1 (nije prihvaceno).Reakcije vezivanja IgG specifične za SARS-CoV-2 ciljaju nukleokapsid ("N") (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), šiljastu domenu vezanja receptora ("RBD") (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), podjedinica 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ naspram Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ naspram Vac+/Inf-) P = 0,012) i vršna podjedinica 2 ("S2") (e) izmjerena je testovima pune venske krvi i na temelju cijepljenja sudionika i prethodnog SARS-CoV-2 (potvrđeno PCR-om i/ ili lateral flow test) infektivni status.'Vac + /Inf +' n = 60 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 4 (žuto).Usporedbe su napravljene korištenjem Kruskal-Wallisovog testa, prilagođenog za višestruke usporedbe korištenjem Dunnovog testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (središnja linija na medijanu, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) s brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka točka predstavlja donatora.Neobrađeni podaci daju se u obliku datoteka neobrađenih podataka.
Nakon uzorkovanja krvi, sudionici su zamoljeni da sami prijave pozitivne rezultate PCR-a i/ili testa bočnog protoka na COVID-19;ako su sudionici bili pozitivni između 1. rujna 2021. i 29. prosinca 2021., javno zdravstvo Walesa smatralo se da su zaraženi Delta (B.1.617.2) varijantom koronavirusa i Omicronom (B.1.1.529) nakon 29. prosinca 2021., kada ova opcija zabrinutosti postaje dominantna.Među 148 darivatelja koji se mogu procijeniti, primijetili smo stopu infekcije od 26,3% (39/148) unutar 6 mjeseci od darivanja krvi, od kojih je 38 primilo drugu ili treću dozu cjepiva protiv COVID-19 (proboj infekcije dogodio se nakon što su Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) mRNA cjepivo ili AstraZeneca cjepivo (ChAdOx1 nCoV-19));zaražen je i necijepljeni donor.Veličina IFN-γ-pozitivnih odgovora T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 bila je znatno niža u onih koji su prijavili pozitivan dijagnostički test na COVID-19 nego u neinficiranih donora (P <0,0001; slika 2a), uglavnom zbog optimalna indukcija odgovora T stanica cijepljenjem kod nekih sudionika (P = 0,050; dopunska slika 1).Nije bilo korelacije između veličine odgovora IFN-γ+ T stanica i vremena do pozitivnog rezultata testa na COVID-19 (dodatna slika 2).Nasuprot tome, niti odgovori na RBD-, S1-, S2-vezujući IgG (slike 2b–d) niti odgovori na RBD-, S1-neutralizirajuća protutijela nisu bili specifični za divlji tip ili delta SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Dodatna slika 3) može razlikovati ljude koji su izloženi riziku od infekcije.Međutim, niski N-vezani IgG odgovori protiv SARS-CoV-2 u korelaciji su s rizikom od infekcije COVID-19 (P = 0,0084; Slika 2e);oni koji su bili pozitivni na testu imali su 85% manju vjerojatnost (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (dodatna slika 4).
U uzorcima venske krvi zdravih darivatelja (n = 148) procijenjeni su odgovori T-stanica specifični za SARS-CoV-2 IFN-γ+ (a; ****P < 0,0001) i vezanje Spike receptora na specifični SARS-CoV -2 poticaj.domena ("RBD") (b), podjedinica šiljka 1 ("S1") (c), podjedinica šiljka 2 ("S2") (d) i nukleokapsida ("N") (e; **P = 0,0084 ) .Identificirani sudionici koji su bili pozitivni na COVID-19 (PCR i/ili bočni protok);sve infekcije dogodile su se unutar 6 mjeseci od uzorkovanja krvi.Usporedbe su napravljene korištenjem dvosmjernog Mann-Whitneyjevog testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (središnja linija na medijanu, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) s brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka točka predstavlja donatora.ns nije bitan.Toplinska karta f prikazuje Spearmanove korelacije ranga između varijabli za navedeni skup podataka.Usporedbe koje nisu bile statistički značajne isključene su iz matrice i označene praznim ćelijama.Neobrađeni podaci daju se u obliku datoteka neobrađenih podataka.
Unaprijed postavljena dijagnostička pozitivna granična vrijednost od 14 smatrala se previše proizvoljnom za procjenu rizika od ponovne infekcije, pa su uspostavljeni interkvartilni rasponi kako bi se utvrdili apsolutni parametri rizika.Statistički model, koji je uključivao samo varijable koje su imale značajan učinak na rezultate, pokazao je da je veličina odgovora IFN-γ+ T stanica specifičnog za SARS-CoV-2 najvažniji imunološki biomarker za određivanje šansi pojedinca da bude testiran na COVID.-19 pozitivan (Slika 2f i Dodatna slika 4).Bolesnici sa SARS-CoV-2 specifičnim IFN-γ+ odgovorom T stanica u trećem (194-489 pg/ml IFN-γ) i četvrtom (>489 pg/ml IFN-γ) kvartilu 65% (P = 0,055; OR 0,35, 95% CI: 0,11–1,00) i 90% (P = 0,0050; OR 0,098, 95% CI: 0,014–0,42) imalo je više sudionika.Šanse su male (dopunska slika 4).Sveukupno, sudionici sa SARS-CoV-2 specifičnim T-staničnim odgovorom iz venske krvi ≤79 pg/mL IFN-γ imali su 43,2% rizik od probojne infekcije nakon 6 mjeseci, u usporedbi s odgovorom >489 pg/mL.ml IFN-γ imala je rizik od infekcije od 5,4% (tablica 2).
Testiranje pune venske krvi je ograničenog opsega zbog potrebe da uzorke uzima flebotomist.Kako bi se povećala dostupnost testiranja T stanica i IgG na SARS-CoV-2, razvijena je alternativna metoda uzorkovanja kapilarne krvi kako bi se sudionicima omogućilo da uzmu uzorke krvi iz prsta kod kuće.Koliko nam je poznato, nije bilo prethodnih izvješća o mjerenju antigen-specifične funkcije T stanica u uzorcima kapilarne krvi.Prethodno je pokazana jaka korelacija između broja limfocita dobivenih korištenjem usporedivih uzoraka kapilarne i venske krvi.Osim toga, objavljeno je da testovi temeljeni na punoj krvi koji mjere odgovore T-stanica specifičnih za SARS-CoV-2 koriste samo 320 µL venske krvi,20 otklanjajući zabrinutost oko učestalosti progenitorskih T-stanica u uzorcima kapilarne krvi.
Koristili smo ovu standardiziranu kolaborativnu analizu visoke propusnosti SARS-CoV-2 T stanica i IgG protutijela na temelju kapilarne pune krvi za mjerenje staničnog i humoralnog imunološkog odgovora kod sudionika s različitim komorbiditetima i statusom prethodne cijepljenja/infekcije (Tablica 1).regrutirane iz cijele Ujedinjene Kraljevine između 24. siječnja i 14. ožujka 2022.14. Većina (90,9%) uzoraka prstiju ispravno je dobivena i poslana u laboratorij unutar 24 sata od prikupljanja.U nekim slučajevima, uzorci su primljeni unutar 48 sati od vađenja krvi, ali niti jedan od tih uzoraka nije prošao provjere kvalitete i nije utjecao na ukupna mjerenja T stanica ili protutijela (dodatna slika 5).Iako je bilo razlika u veličini SARS-CoV-2-specifičnog IFN-γ+ T-staničnog odgovora izmjerenog u odgovarajućim uzorcima kapilarne i venske krvi kod nekih pojedinaca, sveukupno nije bilo značajnih razlika (P = 0,88; Dodatna slika 6. ).).
Odgovori T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 IFN-γ+ bili su značajno povećani kod cijepljenih osoba koje su također prijavile prethodnu infekciju (P = 0,0001), ali ne značajno više nego kod prethodno zaraženih necijepljenih osoba donora (P = 0,19, sl. 3a).).IgG odgovori na šiljasti glikoprotein (RBD, S1, S2) bili su značajno viši u cijepljenih darivatelja nego u necijepljenih darivatelja, bez obzira na prethodni status infekcije (Slika 3b-d).Zanimljivo je da je srednji N-vezani IgG odgovor bio najveći kod prethodno zaraženih necijepljenih sudionika u usporedbi s cijepljenim sudionicima, iako to nije doseglo značaj (Slika 3e).Među necijepljenim i neinficiranim darivateljima koji su se sami izjasnili, 15 od 37 (40,5%) sudionika bilo je pozitivno na N-vezani IgG, iznad prethodno utvrđenog praga od 2,0 BAU/mL14;ovih 15 sudionika Dvanaest od ovih pacijenata imalo je pozitivan test na IFN-γ+ odgovor T stanica iznad prethodno utvrđenog praga od 22,7 pg/mL IFN-γ14.Stoga je vjerojatno da su ti sudionici prethodno bili zaraženi SARS-CoV-2 i da nisu testirani na COVID-19 zbog osobnog izbora, nedostatka opreme za PCR i/ili lateralni protok ili su bili asimptomatski.Iako je postojala značajna korelacija između T-staničnih odgovora na IFN-γ+ i N-vezane razine IgG u necijepljenih darivatelja (P = 0,0044; Dodatna slika, N-vezani IgG odgovor smanjivao se brže od N-vezanog IgG odgovora, dok je IFN-γ + T-stanični odgovori održani su bez obzira na status cijepljenja, iako je broj donora 50 tjedana nakon izlaganja bio nizak (dodatna slika 8). Tip cijepljenja općenito se malo razlikovao u promatranim IgG odgovorima specifičnim za SARS-CoV-2, T stanice i povezane s RBD-om, iako su sudionici koji su primili dvije doze BNT162b2 praćene revakcinacijom mRNA1273 pokazali značajno više razine IFN-γ + T stanica koje su bile osjetljivije na SARS-CoV-2 od onih koji su primili dvije doze ChAdOx1 i BNT162b2 (dodatna Slika 9) Osim toga, prijavljeni komorbiditeti imali su malu ukupnu razliku u promatranim odgovorima T stanica u usporedbi sa zdravim donorima (dodatna slika 10).
IFN-γ+ T-stanični odgovori specifični za SARS-CoV-2 izmjereni su testom kapilara pune krvi i temeljeni su na cijepljenju sudionika i prethodnom infektivnom statusu SARS-CoV-2 (potvrđeno PCR-om i/ili testom bočnog protoka).'Vac + /Inf +' n = 42 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 158 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 33 (žuto), 'Vac- /Inf-' n = 37 (siva).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- u odnosu na Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ u odnosu na Vac- /Inf-) P = 0,014 .SARS-CoV-2 specifične reakcije vezanja IgG na šiljastu domenu vezanja receptora ("RBD") (b; ****P < 0,0001, ns: nije značajno), šiljasta podjedinica 1 ("S1") (c; * * **P < 0,0001, ns: nije značajno), podjedinica 2 ("S2") (d; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) i nukleokapsida ("N") (e; ****P < 0,0001, ns nije značajno) mjerene su pomoću analize pune venske krvi i na temelju cijepljenja sudionika i prethodnog SARS-CoV-2 (potvrđeno PCR-om i/ili analizom bočnog protoka) Infekcije su podijeljene prema status.'Vac + /Inf +' n = 46 (zeleno), 'Vac + /Inf-' n = 182 (plavo), 'Vac-/Inf +' n = 34 (žuto), 'Vac-/Inf-' n = 37 (siva).Usporedbe su napravljene korištenjem Kruskal-Wallisovog testa, prilagođenog za višestruke usporedbe korištenjem Dunnovog testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (središnja linija na medijanu, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) s brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka točka predstavlja donatora.Neobrađeni podaci daju se u obliku datoteka neobrađenih podataka.
Kao i prije, od sudionika se tražilo da prijave pozitivne rezultate PCR-a i/ili bočnog krvotoka na COVID-19;prema Agenciji za zdravstvo Ujedinjenog Kraljevstva, pretpostavljalo se da su sudionici bili zaraženi koronavirusom Omicron (B.1.1.529) u vrijeme testiranja pozitivne varijante virusa, jer je to bila dominantna varijanta u Ujedinjenom Kraljevstvu tijekom razdoblja istraživanja.Među 299 darivatelja koji se mogu procijeniti, primijetili smo stopu infekcije od 8,0% (24/299) unutar tri mjeseca od kapilarne donacije, od kojih sedam nije bilo cijepljeno.Udio komorbiditeta među svim sudionicima bio je manji kod onih koji su bili pozitivni na COVID-19 (10,7%) od onih koji su bili negativni na COVID-19 (24,4%, Tablica 1), što može biti posljedica činjenice da su sudionici s određenim bolesti su oprezniji i štite od mogućih posljedica poput dijabetesa i raka.Kao što je primijećeno u kohorti venske krvi, SARS-CoV-2-specifične interferon-γ (IFN-γ)-pozitivne T stanice izmjerene u uzorcima kapilarne krvi pojedinaca koji su prijavili pozitivan dijagnostički test za COVID-19.Magnituda odgovora bila je značajno niža nego u neinficiranih donora (P = 0,034; slika 4a) zbog relativno slabe indukcije odgovora T stanica cijepljenjem i/ili prethodnom infekcijom (dodatna slika 11).Slično tome, niti odgovori IgG koji vežu RBD-, S1-, S2 (slike 4b–d) niti odgovori neutralizirajućih protutijela RBD-, S1 nisu bili specifični za divlji tip ili delta SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Dopunska slika 12).Mogu se identificirati pojedinci kod kojih postoji značajan rizik od infekcije.Za razliku od venske kohorte, IgG odgovori povezani s N također ne razlikuju rizik od COVID-19 (Slika 4e), što sugerira da varijanta Omicron (B.1.1.529) povećava imunološku evaziju kod prethodno zaraženih osoba, kao što je nedavno opisano 21. Nasuprot tome, snaga SARS-CoV-2-specifičnog IFN-γ T-staničnog odgovora ponovno je bila najvažnija varijabla u određivanju pojedinačnih izgleda da će test biti pozitivan na COVID-19 (Slika 4f).Sve u svemu, sudionici s odgovorom kapilarnih T-stanica specifičnim za SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL IFN-γ imali su 14,9% rizika od infekcije nakon tri mjeseca u usporedbi s odgovorom >141,6 pg/mL.ml IFN.-γ je imao rizik od infekcije od 4,4% (Tablica 2).
IFN-γ+ T-stanični odgovori specifični za SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) i SARS-CoV-2 specifična IgG-ciljana domena vezanja receptora ("RBD") (b), šiljasta podjedinica 1 (' S1′) (c), šiljasta podjedinica 2 ('S2') (d) i reakcija vezanja nukleokapsida ('N') (e).Sudionici koji su identificirani kao pozitivni na testove na COVID-19 (PCR i/ili test bočnog protoka krvi), sve infekcije dogodile su se unutar 3 mjeseca od uzorkovanja krvi.Usporedbe su napravljene korištenjem dvosmjernog Mann-Whitneyjevog testa.Podaci se prikazuju kao grafikoni (središnja linija na medijanu, gornja granica na 75. percentilu, donja granica na 25. percentilu) s brkovima na minimalnim i maksimalnim vrijednostima.Svaka točka predstavlja donatora.ns nije bitan.Toplinska karta f prikazuje Spearmanove korelacije ranga između varijabli za navedeni skup podataka.Usporedbe koje nisu bile statistički značajne isključene su iz matrice i označene praznim ćelijama.Neobrađeni podaci daju se u obliku datoteka neobrađenih podataka.
Kako prelazimo u sljedeću fazu pandemije COVID-19, fokus će se pomaknuti s prevencije na individualno upravljanje rizikom i prepoznavanje ranjivih članova društva.Uspostavljanje korelacija imuniteta na COVID-19 ključno je za učinkovito prepoznavanje i liječenje ovih visokorizičnih skupina.Sada postoji sve više dokaza da T-stanični imunitet štiti od infekcije SARS-CoV-2 i ograničava ozbiljnost COVID-1910.Ovdje predstavljeni podaci pokazuju da kombinirana snaga SARS-CoV-2-specifičnih IFN-γ+ odgovora T stanica protiv šiljastih, membranskih i nukleokapsidnih strukturnih proteina daje veću zaštitu od COVID-19 nego što to čini vezanje protutijela.19 potiče ili neutralizira odgovore .i treba ga uzeti u obzir pri procjeni imuniteta pojedinca i/ili kolektiva.RNA virusi poput SARS-CoV-2 ili virusa influence A (IAV) izbjegavaju serološku neutralizaciju brzom evolucijom izloženih epitopa B-stanica na površinskim antigenima koje prepoznaju antitijela.Zaštitni imunološki odgovor koji pružaju T stanice može odražavati ciljanje epitopa iz očuvanijih regija virusnih proteina koji ne mogu brzo izbjeći imunološki odgovor.Zaštita posredovana T-stanicama protiv novih varijanti SARS-CoV-2 slična je heterosubtipskoj zaštiti posredovanoj ciljanjem T-stanica na očuvane intrinzične proteine ​​koji se vide u podtipovima IAV22,23.
Unatoč golemom potencijalu za mjerenje staničnog imunološkog odgovora na COVID-19, relativno malo pažnje posvećeno je razvoju točnih, visokoučinkovitih, standardiziranih testova T-stanica.Tradicionalne složenosti i troškovi povezani s mjerenjem odgovora T stanica onemogućuju točno određivanje imunosti T stanica pri probiru imunosti velike populacije.Dok je nedavno postalo dostupno nekoliko komercijalnih testova stimulacije peptida u cijeloj krvi, svima je trenutno potreban flebotomist za dobivanje krvi, što ograničava dostupnost i opseg.Kapilarni krvni sustavi široko se koriste za određivanje prevalencije antitijela SARS-CoV-2 u populaciji.Prilagodili smo testove kapilarne krvi za izvođenje testova stimulacije peptida u cijeloj krvi za procjenu reaktivnosti T stanica na strukturne proteine ​​SARS-CoV-2 i odgovora specifičnih antitijela za SARS-CoV-2.Zapravo, kombinirano mjerenje antitijela specifičnih za SARS-CoV-2 i T stanica u istom uzorku kapilarne krvi vrlo je privlačno: (i) smanjuje potrebu za višestrukim krvnim testovima po sudioniku, (ii) poboljšava iskustvo i razumijevanje sudionika;(iii) poboljšati logistiku i smanjiti dupliciranje, (iv) smanjiti utjecaj na okoliš jer je potrebno manje laboratorijskog potrošnog materijala i isporuke uzoraka.Iako je ukupna reaktivnost IFN-γ bila slična između odgovarajućih uzoraka venske i kapilarne krvi, uočeno je da je niža u skupini sudionika iz kapilarne krvi (Slika 4a) u usporedbi s kohortom iz venske krvi (Slika 2a).Vrijednosti IFN-γ Postoji nekoliko objašnjenja za ovaj nalaz, naime, velik broj sudionika s komorbiditetima koji zahtijevaju imunosupresivnu terapiju regrutiran je u kohortu uzorkovanja kapilarne krvi (tablica 1) i vitalnost i/ili funkcija T stanica dobivenih iz vaskularnih uzorci mogu biti niski, posebno uzimajući u obzir uvjete dugotrajnog skladištenja uzoraka prije stimulacije peptidima.
Trenutno široko dostupno cjepivo protiv COVID-19 pruža najbolju zaštitu od teške bolesti za većinu primatelja unutar 6 mjeseci od cijepljenja8.Ohrabrujuće, unatoč slaboj serološkoj neutralizaciji varijanti SARS-CoV-26,7 izazvanoj cjepivom, odgovori T-stanica izazvani cijepljenjem protiv divljeg tipa SARS-CoV-2 ostali su vrlo reaktivni, jer se pojavilo 25 drugih.Podaci koje ovdje predstavljamo pokazuju važnost šire procjene imunogenosti cjepiva, ističući cjepiva s nedovoljnom imunošću T-stanica za sprječavanje iznenadne infekcije i trajnog prijenosa virusa.Također smo primijetili da su mnoge necijepljene osobe regrutirane u kapilarnu kohortu imale značajan odgovor T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 (i N-vezujući IgG) bez obzira na prethodno cijepljenje, što je vjerojatno zbog prethodne infekcije.Umjesto cijepljenja odgovarajućih pojedinaca, njihov rizik od infekcije treba procijeniti na temelju njihovog trenutnog statusa cijepljenja i donesenih odluka.
Ograničenja ove studije uključuju jamstvo da su sudionici sami prijavili infekciju SARS-CoV-2 nakon prikupljanja krvi kako bi se utvrdila važnost imuniteta;neki sudionici mogu imati asimptomatsku infekciju i ne mogu se podvrgnuti PCR-u i/ili testiranju bočnog protoka na COVID-19.U našem skupu podataka nedostajale su i informacije o lijekovima koje su sudionici uzimali u vrijeme uzorkovanja krvi.Osim toga, s obzirom na to da su svi naši sudionici prijavili samo blage/umjerene simptome ili nikakve simptome, nije bilo moguće identificirati imunološke odgovore iz našeg skupa podataka koji su predviđali povećan rizik od teške bolesti i hospitalizacije zbog COVID-19.Međutim, prisutnost odgovora CD8+ T stanica na epitope specifične za nukleokapside nedavno je povezana sa zaštitom od teške bolesti COVID-1926.Osim toga, ovdje korišteni test nije mjerio odgovore T stanica na specifične rano izražene nestrukturne proteine ​​SARS-CoV-2 za koje je nedavno pokazano da se preferirano nakupljaju u seronegativnih zdravstvenih radnika koji su bili u kontaktu sa zaraženim pacijentima.Na temelju ovog rada, s obzirom na prevalenciju prijenosa u zajednici u vrijeme regrutacije i visoku vjerojatnost kontaktne infekcije u populaciji, čini se da se broj T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 pronađen u našim testovima također može ukloniti.subkliničke infekcije u našim kohortama.Konačno, nismo mjerili proizvodnju interleukina 2 u T-stanicama jer je naš prethodni rad pokazao lošu identifikaciju odgovora T-stanica specifičnih za SARS-CoV-214, iako odgovori specifični za IL-2 mogu ukazivati ​​na već postojeću unakrsnu reaktivnost.stanice povezane s obranom od infekcije SARS-CoV-211.
Uzeti zajedno, ovi podaci naglašavaju temeljnu potrebu za dugoročnim longitudinalnim studijama koje uključuju odgovore T stanica specifične za SARS-CoV-2 u mjere imuniteta na razini populacije.Ovi napori mogu biti potpomognuti razvojem novog testa kapilarne krvi koji mjeri odgovor T-stanica.
Istraživački projekt regrutirao je sudionike od veljače 2021. do ožujka 2022. Skupina zdravih darivatelja (n = 148) koji su darivali uzorke venske krvi sastojala se prvenstveno od sveučilišnog osoblja i studenata koji sudjeluju u službi probira na COVID-19 Sveučilišta u Cardiffu ili osoblja osnovne škole u Cardiff.Svi su sudionici inače bili zdravi i nisu prijavili uzimanje nikakvih imunosupresivnih lijekova (vidi Tablicu 1 za karakteristike).Kohorta sudionika koji su darivali uzorke kapilarne krvi uključivala je sve dobrovoljne darivatelje (starije od 18 godina) iz cijele Ujedinjene Kraljevine.Od 24. siječnja do 14. ožujka 2022. u istraživanje je bilo uključeno 342 sudionika, od kojih je 299 predalo uzorke krvi u laboratorij.Mnogi sudionici ostali su necijepljeni i/ili su prijavili ozbiljne komorbiditete, uključujući autoimune bolesti i rak (vidi Tablicu 1 za karakteristike).Ova je studija dobila etičko odobrenje od Povjerenstva za etiku istraživanja Newcastlea i North Tynesidea 2 (ID IRAS: 294246) i Povjerenstva za etiku istraživanja Medicinskog fakulteta Sveučilišta u Cardiffu (SREC ref: SMREC 21/01).Svi sudionici dali su pismeni informirani pristanak prije uključivanja.Sudionici nisu dobili nikakvu naknadu za sudjelovanje u ovoj studiji.
Uzorci venske krvi dobiveni su venepunkcijom u 6 ili 10 ml litijevih ili natrijevih heparinskih vakuumskih posuda (BD).Uzorci kapilarne krvi dobiveni su lancetom za prste i potom sakupljeni u heparinske mikrospremnike (BD).Potrebno je najmanje 400 µl krvi;svaki uzorak manji od ove količine bit će odbijen.Ostali razlozi za odbacivanje uzorka uključivali su masivnu koagulaciju i/ili hemolizu i neuspjeh prikupljanja viskozne plazme za analizu (dodatna slika 5).Za procjenu odgovora antitijela bilo je dostupno ukupno 299 uzoraka kapilarne krvi, od čega je 270 uzoraka bilo dostupno i za procjenu odgovora T stanica.
SARS-CoV-2 specifični odgovori T stanica procijenjeni su korištenjem COVID-19 Immuno-T testa (ImmunoServ Ltd) i izvedeni kao što je prethodno opisano14.Ukratko, jedan venski vacutainer od 6 ml ili 10 ml natrijevog heparina (BD) uzet je od svakog sudionika i obrađen u laboratoriju unutar 12 sati od prikupljanja krvi.Iako je većina uzoraka obrađena unutar 24 sata, jedno 400-600 μl heparinizirane kapilarne krvi mikrokrvarenja (BD) prikupljeno je unutar 48 sati od uzorkovanja iz štapića.Uzorci venske i/ili kapilarne krvi stimulirani su odvojenim skupovima peptida specifičnim za SARS-CoV-2 (varijanta divljeg tipa) kao što je prethodno opisano14.Ova biblioteka peptida sadrži 420 15-mernih sekvenci s 11 preklapajućih aminokiselina koje obuhvaćaju cijeli šiljasti protein (S1 i S2) (S; NCBI protein: QHD43416 1), nukleokapsidni fosfoprotein (NP; NCBI protein: QHD43423 2) i membranski glikoprotein (M ; NCBI protein: QHD43419 1) kodirajuće sekvence (nazivaju se "S-/NP-/M-kombinatorna biblioteka peptida").Svi peptidi su pročišćeni do >70%, otopljeni u sterilnoj vodi i korišteni u konačnoj koncentraciji od 0,5 μg/ml po peptidu.Uzorci su inkubirani na 37°C 20-24 sata.Epruvete su zatim centrifugirane na 5000 x g tijekom 3 minute i ~150 µl plazme je sakupljeno s vrha svakog uzorka krvi.Čuvajte uzorke plazme na -20°C do mjesec dana prije pokretanja testova za otkrivanje citokina/antitijela.
IFN-γ mjeren je pomoću IFN-γ ELISA MAX Deluxe Seta (BioLegend, kataloški broj 430116) i izveden prema uputama proizvođača.Odmah nakon što je dodana otopina za zaustavljanje (2N H2SO4), mikroploča je očitana na 450 nm pomoću BioLegend Mini ELISA čitača ploča.IFN-γ je kvantificiran ekstrapolacijom standardne krivulje korištenjem GraphPad Prism.Vrijednosti ispod donje granice detekcije testa zabilježene su kao 7,8 pg/ml, vrijednosti iznad gornje granice detekcije testa zabilježene su kao 1000 pg/ml.
Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG antitijela mjerena su pomoću Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex ploče (Bio-Rad, kat. br. 12014634) i označena prema upute proizvođača.upute .Uzorci koji pokazuju vrijednosti iznad granice kvantifikacije ponovno su analizirani u razrjeđenju 1:1000.Prosječni intenzitet fluorescencije zrna izmjeren je na instrumentu Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Koncentracije protutijela izračunate su VIROTROL SARS-CoV-2 pojedinačnim kontrolnim testom (Bio-Rad) i pretvorene u međunarodne referentne standardne jedinice WHO/NIBSC 20/136 (BAU/mL) pomoću faktora kalibracije proizvođača.
RBD i S1 podjedinica specifična neutralizirajuća protutijela protiv SARS-CoV-2 divljeg tipa i delta (B.1.617) SARS-CoV-2 linija mjerena su pomoću Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad , dio br. 12016897), prema uputama proizvođača.Izmjerite prosječni intenzitet fluorescencije na Bio-Plex 200 (Bio-Rad) i izračunajte postotak inhibicije (tj. neutralizacije) pomoću sljedeće formule:
Testovi infektivne neutralizacije za SARS-CoV-2 provedeni su kao što je prethodno opisano28.Ukratko, 600 PFU divljeg tipa SARS-CoV-2 inkubirano je s trostrukim serijskim razrjeđenjima plazme u duplikatu 1 sat na 37°C.Smjesa je zatim dodana VeroE6 stanicama tijekom 48 sati.Jednoslojevi su fiksirani s 4% paraformaldehida, permeabilizirani s 0,5% NP-40 i inkubirani 1 sat u puferu za blokiranje (PBS koji sadrži 0,1% tween i 3% obranog mlijeka).Primarno protutijelo (anti-nukleokapsid 1C7, Stratech) dodano je puferu za blokiranje 1 sat na sobnoj temperaturi.Nakon ispiranja, sekundarno protutijelo (anti-mišji IgG-HRP, Pierce) dodano je puferu za blokiranje tijekom 1 sata.Jednoslojevi su isprani, razvijeni korištenjem Sigmafast OPD i očitani na Clariostar Omega čitaču ploča.Jažice bez virusa, bez virusa, ali bez antitijela, i normalizirani serumi koji pokazuju srednju aktivnost uključeni su u svaki eksperiment kao kontrole.
Statistička analiza provedena je u GraphPad Prism (verzija 9.4.1).Normalnost skupa podataka testirana je Shapiro-Wilkovim testom.Za sve usporedbe korišteni su neparametarski kriteriji.Za nesparene uzorke korišten je Mann-Whitney test.Svi testovi bili su dvostrani s nominalnim pragom značajnosti od P ≤ 0,05.
Početna istraživačka analiza skupa podataka napravljena je u R (verzija 4.0.3).To uključuje razvoj Spearmanove univarijantne korelacijske matrice ranga, gdje je korelacija između dviju varijabli predstavljena veličinom i bojom kvadrata.Statistička značajnost između asocijacija izračunata je pomoću Spearmanova rho, gdje su vrijednosti ≤0,05 smatrane značajnima.Usporedbe koje nisu bile statistički značajne isključene su iz matrice i označene praznim ćelijama.P-vrijednosti su prilagođene za višestruke usporedbe pomoću Holmove korekcije.Za simulaciju učinka varijabli u skupu podataka na pozitivan odgovor na COVID-19 korišten je binarni logistički regresijski model.IFN-γ T-stanični odgovori i rezultati anti-RBD/S1/S2/N IgG titra pretvoreni su u faktore, gdje je svaki pojedinac dodijeljen odgovarajućem kvartilu za svaki rezultat.Nakon toga, razvijen je inicijalni istraživački model korištenjem glm funkcije u statističkom paketu (V4.0.3).Omjeri izgleda izvedeni iz ovog originalnog modela izdvojeni su iz koeficijenata modela pomoću funkcije 'odds_plot' u paketu OddsPlotty (V1.0.2).Prilikom razvoja modela unakrsne provjere koristili smo funkciju "bestglm" iz paketa bestglm (V0.37.3) kako bismo ograničili pristranost korisnika i osigurali da se može odabrati najbolji podskup prediktora.Odabrana metoda bila je "iscrpna", a informacijski kriterij korišten za procjenu prikladnosti modela bio je AIC.Isti tijek rada opisan gore korišten je za dobivanje omjera izgleda.
Za više informacija o dizajnu studije pogledajte sažetak studije prirode povezan s ovim člankom.
Pisma i zahtjeve za materijalima treba uputiti dr. Martinu Scarru ili profesoru Andrewu Godkinu.Ovaj članak daje izvorne podatke.
R kod koji se koristi za izradu statističkih modela javno je dostupan bez zahtjeva29.Informacije o ponovnom ispisu i licence mogu se pronaći na www.nature.com/reprints.
Munro, APS i sur.Sigurnost i imunogenost sedam cjepiva protiv COVID-19 kao treće doze (booster) nakon dvije doze ChAdOx1 nCov-19 ili BNT162b2 (COV-BOOST) u Ujedinjenom Kraljevstvu: faza 2, slijepo, multicentrično, randomizirano, kontrolirano ispitivanje.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV i sur.Imunogenost, sigurnost i reaktogenost heterolognog primarnog cijepljenja protiv COVID-19 (Com-COV2) korištenjem mRNA, virusnih vektora i proteinskih adjuvantnih cjepiva u Ujedinjenom Kraljevstvu: faza 2, jedno slijepo, randomizirano ispitivanje, test neinferiornosti.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB i sur.Učinkovitost cjepiva protiv COVID-19 kod pacijenata s oslabljenim imunitetom: sustavni pregled i meta-analiza.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Smanjena neutralizacija SARS-CoV-2 mikronske varijante B.1.1.529 serumom nakon imunizacije.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y i Baliser RD Probojna infekcija kod osoba cijepljenih protiv SARS-CoV-2: mjerenje, uzroci i posljedice.Nacionalni svećenik imunologije.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG i sur.Oslabljeni imunološki humoralni odgovor na cjepivo BNT162b2 Covid-19 tijekom 6 mjeseci.N. inž.J. Medicina.385, e84 (2021).
Carreño, JM i sur.Aktivnost seruma rekonvalescenata i cjepiva protiv SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682-688 (2022).
Chemaitelly, H. i sur.Trajanje zaštite katarskog mRNA cjepiva protiv podvarijanti SARS-CoV-2 Omicron BA.1 i BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ i sur.Učestalost memorijskih B stanica smanjuje se s prodorom infekcije delta cjepivom protiv COVID-19.Molekularna medicina EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. i sur.Unakrsno reaktivne memorijske T-stanice povezane su sa zaštitom kontakta s COVID-19 od infekcije SARS-CoV-2.Narodna komuna.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH i sur.Izraziti SARS CoV-2 omikron-reaktivni T-stanični i B-stanični odgovori kod primatelja cjepiva protiv COVID-19.znanost.Imunologija.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu i sur.Naslijeđene T-stanice specifične za SARS-CoV-2 unakrsno prepoznaju varijante Omikrona.Narodna medicina.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ i sur.Mjerenje T stanica specifičnih za SARS-CoV-2 iz pune krvi otkriva asimptomatsku infekciju i imunogenost cjepiva kod zdravih pojedinaca i pacijenata s rakom čvrstog organa Imunologija https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT i sur.Brzo mjerenje T stanica SARS-CoV-2 u punoj krvi cijepljenih i prirodno zaraženih osoba.J. klinički.Investirati.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU i sur.Odgovor na cjepivo protiv COVID-19 kod pacijenata s multiplom sklerozom.instalirati.Neuroni.91, 89–100 (2022).
Bradley RE i sur.Trajna infekcija COVID-19 s Wiskott-Aldrichovim sindromom nestala je nakon terapijskog cijepljenja: prikaz slučaja.J. klinički.Imunologija.42, 32–35 (2022).